Tutoriel

Comment Effectuer le décollement des cellules avec accutase et la congélation avec Bambanker ?

Introduction :

Ce tutoriel vous montre comment procéder pour le décollement des cellules avec accutase ainsi que la congélation avec Bambanker. Faites confiance aux protocoles Dutscher !

1.
Après s’être lavé les mains, allumez la hotte 15 minutes avant la manipulation.
2.
Ne pas oublier d’apporter un bac de glace avec les cryotubes pour le transport des cellules.
3.
Placez les cryotubes dans le bac de glace.
4.
Avant de procéder à l’élimination du milieu, lavez-vous les mains et mettez vos gants.
5.
Eliminez le milieu.
6.
Ne pas oublier de toujours désinfecter le matériel et les réactifs à l’éthanol 95% avant de les rentrer dans la hotte.
7.
Pour le décollement des cellules, utilisez l’accutase qui est un réactif de dissociation cellulaire alternatif à la trypsine. A la réception de l’accutase (100ml), il est recommandé de faire des aliquots et de les stocker à -20°C, à l’abri de la lumière.

L’accutase en cours d’utilisation peut être conservée au réfrigérateur (2-8°C) jusqu’à 1 mois après ouverture. Utilisez à température ambiante.
8.
Ajouter l’accutase (5ml pour un flacon de T25) en recouvrant les cellules. Laissez 1 à 2 minute.s.
9.
Enlevez l’excès d’accutase et en disposer dans la poubelle liquide de milieu.
10.
Attendre entre 5 et 10 minutes puis tapotez le flacon pour décoller les cellules.
11.
Resuspendre les cellules dans du DPBS et les transférer dans un tube.
12.
Sortir le Bambanker du réfrigérateur.
13.
Eliminez le DPBS.
14.
Suspendre les cellules avec 1ml de Bambanker.
15.
Transférez les cellules + Bambanker en cryotubes.
16.
Mettez-les dans le bac de glace puis congeler les cellules à -80°C.
17.
Voir le protocole complet
18.
Les produits utilisés