pour le sang est destiné à la purification de l'ADN total pour une PCR et un transfert Southern fiables. L'ADN total (par exemple, génomique, viral, mitochondrial) peut être purifié à partir de sang total, plasma, sérum, couche leucocytaire, moelle osseus
Le kit MagBeads FastDNA ® pour le sang est basé sur la méthode de purification des particules magnétiques à haute liaison. L'échantillon est lysé et digéré. L'ADN est libéré dans le lysat. Après addition de particules magnétiques et de solution de liaison, l'ADN sera adsorbé à la surface des particules magnétiques et les impuretés telles que les protéines seront éliminées sans adsorption. Les particules adsorbées ont été lavées avec un tampon de lavage pour éliminer les protéines et les impuretés, lavées avec de l'éthanol pour éliminer les sels, et enfin l'ADN a été élué avec un tampon d'élution.
L'extraction d'ADN du sang à l'aide de colonnes à membrane de silice implique plusieurs étapes précises et critiques pour garantir un rendement et une pureté élevés de l'ADN. Voici les étapes typiques de ce procédé, en utilisant des produits comme le **Kit MagBeads FastDNA® pour le sang** ou le **Kit ADN SPINeasy™** :
1. **Préparation de l'échantillon** :
- **Lyse cellulaire** : Le sang est mélangé avec un tampon de lyse (souvent contenant des agents chaotropiques) pour rompre les membranes cellulaires et nucléaires, libérant ainsi l'ADN dans la solution. Des protéines K peuvent être ajoutées pour dégrader les protéines associées à l'ADN.
2. **Liaison de l'ADN à la colonne de silice** :
- **Addition de particules magnétiques et de solution de liaison** : Dans le cas de kits comme le **Kit MagBeads FastDNA®**, des particules magnétiques sont ajoutées pour faciliter la liaison de l'ADN. Alternativement, pour les kits utilisant des colonnes de centrifugation, l'échantillon lysé est directement appliqué sur une colonne à membrane de silice.
- **Centrifugation** : Le lysat est centrifugé à travers la colonne, permettant à l'ADN de se lier à la membrane de silice tandis que les impuretés passent à travers.
3. **Lavage** :
- **Tampons de lavage** : La colonne est lavée plusieurs fois avec des tampons de lavage spécifiques pour éliminer les contaminants tels que les protéines, les lipides, et les sels. Les tampons de lavage contiennent souvent de l'éthanol pour aider à éliminer les impuretés sans désorber l'ADN de la membrane de silice.
- **Centrifugation** : Après chaque lavage, une centrifugation est effectuée pour éliminer les tampons de lavage et les contaminants dissous.
4. **Élution de l'ADN** :
- **Tampon d'élution** : L'ADN est récupéré en ajoutant un tampon d'élution à la colonne et en centrifugeant de nouveau. Le tampon d'élution est généralement une solution à faible teneur en sel, parfois avec un pH légèrement basique pour favoriser la désorption de l'ADN de la membrane de silice.
- **Récupération de l'ADN** : L'ADN purifié est collecté dans un tube de collecte à la base de la colonne après la centrifugation finale.
### Produits correspondants :
- **Kit MagBeads FastDNA® pour le sang** : Utilise des particules magnétiques pour la liaison et la purification de l'ADN, incluant les étapes de lyse, liaison, lavage et élution décrites ci-dessus.
- **Kit ADN SPINeasy™** : Utilise des colonnes de centrifugation à membrane de silice pour l'extraction rapide et efficace de l'ADN, suivant un procédé similaire avec l'application directe du lysat sur la colonne, suivie des étapes de lavage et d'élution.
### Conclusion
L'utilisation de ces kits permet d'extraire efficacement l'ADN du sang en moins de 30 minutes, garantissant un ADN de haute pureté et de rendement suffisant pour des applications en aval comme la PCR, le séquençage, et d'autres analyses moléculaires.
L'extraction d'ADN du sang à l'aide de colonnes à membrane de silice implique plusieurs étapes précises et critiques pour garantir un rendement et une pureté élevés de l'ADN. Voici les étapes typiques de ce procédé, en utilisant des produits comme le **Kit MagBeads FastDNA® pour le sang** ou le **Kit ADN SPINeasy™** :
1. **Préparation de l'échantillon** :
- **Lyse cellulaire** : Le sang est mélangé avec un tampon de lyse (souvent contenant des agents chaotropiques) pour rompre les membranes cellulaires et nucléaires, libérant ainsi l'ADN dans la solution. Des protéines K peuvent être ajoutées pour dégrader les protéines associées à l'ADN.
2. **Liaison de l'ADN à la colonne de silice** :
- **Addition de particules magnétiques et de solution de liaison** : Dans le cas de kits comme le **Kit MagBeads FastDNA®**, des particules magnétiques sont ajoutées pour faciliter la liaison de l'ADN. Alternativement, pour les kits utilisant des colonnes de centrifugation, l'échantillon lysé est directement appliqué sur une colonne à membrane de silice.
- **Centrifugation** : Le lysat est centrifugé à travers la colonne, permettant à l'ADN de se lier à la membrane de silice tandis que les impuretés passent à travers.
3. **Lavage** :
- **Tampons de lavage** : La colonne est lavée plusieurs fois avec des tampons de lavage spécifiques pour éliminer les contaminants tels que les protéines, les lipides, et les sels. Les tampons de lavage contiennent souvent de l'éthanol pour aider à éliminer les impuretés sans désorber l'ADN de la membrane de silice.
- **Centrifugation** : Après chaque lavage, une centrifugation est effectuée pour éliminer les tampons de lavage et les contaminants dissous.
4. **Élution de l'ADN** :
- **Tampon d'élution** : L'ADN est récupéré en ajoutant un tampon d'élution à la colonne et en centrifugeant de nouveau. Le tampon d'élution est généralement une solution à faible teneur en sel, parfois avec un pH légèrement basique pour favoriser la désorption de l'ADN de la membrane de silice.
- **Récupération de l'ADN** : L'ADN purifié est collecté dans un tube de collecte à la base de la colonne après la centrifugation finale.
### Produits correspondants :
- **Kit MagBeads FastDNA® pour le sang** : Utilise des particules magnétiques pour la liaison et la purification de l'ADN, incluant les étapes de lyse, liaison, lavage et élution décrites ci-dessus.
- **Kit ADN SPINeasy™** : Utilise des colonnes de centrifugation à membrane de silice pour l'extraction rapide et efficace de l'ADN, suivant un procédé similaire avec l'application directe du lysat sur la colonne, suivie des étapes de lavage et d'élution.
### Conclusion
L'utilisation de ces kits permet d'extraire efficacement l'ADN du sang en moins de 30 minutes, garantissant un ADN de haute pureté et de rendement suffisant pour des applications en aval comme la PCR, le séquençage, et d'autres analyses moléculaires.
