Comment Réaliser une analyse médico-légale des cheveux
Les cheveux sont des éléments de preuve d'une grande importance découverts sur les lieux de crime, régulièrement soumis à des tests pour détecter la présence de drogues ou de carences nutritionnelles, et sont également soumis à des analyses d'ADN. Cependant, la préparation des échantillons de preuve constitue souvent un obstacle majeur. Le choix adéquat d'une matrice de lyse pourrait atténuer ces obstacles tout en préservant voire en améliorant le rendement de l'analyte ciblé.
La matrice de lyse idéale ainsi que le protocole d'homogénéisation :
- Permettent la dissolution efficace et rapide des échantillons complexes.
- Génèrent des rendements élevés pour l'analyte ciblé.
- Produisent des résultats hautement reproductibles.
- Éliminent les risques de contamination croisée.
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1.Faites votre sélection de matrice de lyse
Travailler avec des échantillons capillaires exige l'utilisation de matrices de lyse robustes et modérément réactives, telles que celles fabriquées en acier inoxydable, afin d'assurer une lyse complète et efficace.
Les matrices de lyse appropriées pour les échantillons capillaires incluent les versions Lysing Matrix S et Lysing Matrix SS de MP Bio, qui se distinguent par leur taille. Les billes conçues en acier inoxydable se révèlent particulièrement avantageuses pour l'extraction de l'ADN des cheveux, car elles n'interagissent pas avec l'ADN, améliorant ainsi le rendement par rapport aux matériaux qui pourraient potentiellement réagir.
Matrice de lyse S : billes en acier inoxydable de 1/8 de pouce
Lysing Matrix SS : billes de broyage en acier inoxydable de 6,35 mm (légèrement plus agressives)
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2.Utilisation de la matrice de lyse
Les matrices de lyse se révèlent aisées à employer et atteignent une efficacité accrue en conjonction avec des dispositifs de percussion dédiés tels que les appareils FastPrep de MP Bio.
En premier lieu, il est primordial de choisir un tube de matrice de lyse à la taille adaptée en fonction des dimensions de l'échantillon. Les tubes Lysing Matrix S de 2 ml de MP Bio peuvent traiter jusqu'à 500 mg d'échantillon par processus, tandis que les tubes Lysing Matrix S de 50 ml sont aptes à traiter jusqu'à 7 g par préparation. Sélectionner la dimension adéquate de tube facilitera la rationalisation de votre flux de travail dans le domaine médico-légal.
Les échantillons capillaires peuvent être déposés directement sur la matrice de lyse à l'aide d'un tampon ou d'eau, bien qu'il puisse être judicieux de découper les cheveux en fragments de 3 à 6 cm. Une fois chargés, placez les tubes dans l'appareil FastPrep et traitez les échantillons à une vitesse et selon des intervalles temporels ajustés pour parvenir au degré de lyse souhaité. Il peut être nécessaire d'adapter les paramètres de traitement spécifiques pour optimiser et normaliser le protocole.
L'emploi du homogénéisateur FastPrep-24MP sur paillasse a réduit le temps nécessaire à l'extraction de l'éthyl glucuronide de toute une nuit à seulement 40 secondes pour les échantillons capillaires, conférant un avantage net par rapport à une simple découpe des cheveux. Les coûts supplémentaires liés aux consommables et à l'équipement sont compensés par les gains de temps substantiels et l'amélioration de la récupération lors de l'extraction.
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3.Utilisation pratique : Évaluation et procédure pour l'EtG
L'éthyl glucuronide (EtG) est le marqueur privilégié pour évaluer l'abstinence et la consommation excessive chronique d'alcool.
Les échantillons d'EtG sont habituellement mis en incubation dans un bain de sonication pendant la nuit afin d'extraire les analytes des échantillons capillaires, ce qui engendre un temps de traitement nettement plus long comparé à d'autres tests en laboratoire. L'utilisation de billes en acier inoxydable conjointement avec l'appareil FastPrep-24™ accélère le processus d'extraction et accroît le rendement d'EtG de 114 % par rapport à la sonication.
Procédure :
- Découpez 75 mg d'échantillons de cheveux en tronçons de 3 à 6 cm.
- Placez les échantillons capillaires coupés dans des tubes de 2 ml contenant des billes d'acier.
- Introduisez de l'eau déminéralisée.
- Chargez les tubes dans l'appareil FastPrep-24™ et traitez pendant 2 cycles de 1 minute à une vitesse de réglage de 6,0 m/s.
